Исследование цитотоксического действия секреторной фосфолипазы A₂ яда Vipera nikolskii на модели клеточных линий HeLa и ECV340

Яды змей давно являются объектом исследования с целью получения новых противоопухолевых соединений. Секреторная фосфолипаза А₂ змей обладает цитотоксическими свойствами, которые реализуются с помощью различных механизмов в зависимости от строения фермента и типа клеток. Клетки HeLa и ECV340 были использованы как модель для оценки токсического действия сФЛА₂ в составе яда V. nikolskii без и с ингибированием сФЛА_2.. В качестве ингибитора сФЛА₂ применяли Varespladib. С целью понимания механизма токсического действия сФЛА₂ активировали фермент, добавляя в пробы эмульсию фосфолипидов, бычий сывороточный альбумин и Са²⁺. Полученные результаты свидетельствуют, что цитотоксическое действие сФЛА₂ в отношении клеток ECV 340 связано с каталитической активностью фермента; слабый цитотоксический эффект яда на клетки HeLa сохранялся при активации фермента.

Таким образом, нами предложен методический подход, позволяющий оценить токсический эффект сФЛА₂, обладающей ферментативной активностью, в составе цельного яда V. nikolskii в отношении различных клеточных линий.

1. Tasoulis T., Isbister G. K. A review and database of snake venom proteomes // Toxins (Basel). ‒ 2017. – Vol. 9, № 9. – P. 290. https://doi.org/10.3390/toxins9090290.

2. Snake venom phospholipase A2 enzymes // Handbook of Venoms and Toxins of Reptiles. ‒ CRC Press, 2020. ‒ P. 189–222.

3. Lomonte B., Angulo Y., Moreno E. Synthetic peptides derived from the C Terminal region of Lys49 Phospholipase A2 Homologues from Viperidae Snake Venoms: Biomimetic activities and potential applications // Curr. Pharm. Des. Bentham Science Publishers Ltd. ‒ 2010. ‒ Vol. 16, № 28. ‒ P. 3224–3230. https://doi.org/10.2174/138161210793292456.

4. Benati R. B., Costa T. R., Cacemiro M. D. C. et al. Cytotoxic and pro-apoptotic action of MjTX-I, a phospholipase A2 isolated from Bothrops moojeni snake venom, towards leukemic cells // J. Venom. Anim. Toxins Incl. Trop. Dis. BioMed Central Ltd. ‒ 2018. ‒ Vol. 24, № 1. https://doi.org/10.1186/S40409-018-0180-9.

5. Nikolaou A., Kokotou M. G., Vasilakaki S., Kokotos G. Small-molecule inhibitors as potential therapeutics and as tools to understand the role of phospholipases A2 // Biochim. Biophys. Acta Mol. Cell. Biol. Lipids. ‒ 2019. ‒ Vol. 1864, № 6. ‒ P. 941–956. https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2018.08.009.

6. Kovalchuk S. I., Ziganshin R. H., Starkov V. G. et al. Quantitative proteomic analysis of venoms from russian vipers of pelias group: phospholipases A2 are the main venom components // Toxins (Basel). ‒ 2016. ‒ Vol. 8, № 4. ‒ Р. 105. https://doi.org/10.3390/toxins8040105.

7. Ramazanova A. S., Zavada L. L., Starkov V. G. et al. Heterodimeric neurotoxic phospholipases h j – the first proteins from venom of recently established species Vipera nikolskii: Implication of venom composition in viper systematics // Toxicon. ‒ 2008. ‒ Vol. 51. ‒ P. 524‒537. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2007.11.001.

8. Ayvazyan N., Ghukasyan G., Ghulikyan L. et al. The contribution of phospholipase A2 and metalloproteinases to the synergistic action of viper venom on the bioenergetic profile of vero cells // Toxins. ‒ 2022. ‒ Vol. 14. ‒ P. 724. https://doi.org/doi.org/10.3390/toxins14110724.

9. Hiu J. J., Yap M. K. K. Cytotoxicity of snake venom enzymatic toxins: phospholipase A2 and L-amino acid oxidase // Biochemical Society Transactions. ‒ 2020. ‒ Vol. 48. ‒ P. 719–731. https://doi.org/10.1042/BST20200110.

10. Cheremnykh E. G., Osipov A. V., Starkov V. G. et al. Comparative study of the effect of snake venoms on the growth of ciliates TETRAHYMENA PYRIFORMIS: identification of venoms with high antiprotozoal activity // Reports of the Russian Academy of Sciences. Life Sciences. ‒ 2022. ‒ Vol. 503. ‒ P. 197–202. https://doi.org/10.31857/S2686738922020068.